bac法测蛋白浓度_bac法测蛋白含量

       最近有些忙碌，今天终于有时间和大家聊一聊“bac法测蛋白浓度”的话题。如果你对这个领域还比较陌生，那么这篇文章就是为你而写的，让我们一起来了解一下吧。

1.bca法测定蛋白质的含量实验报告设置5组标准液的目的是什么

2.BCA法测了蛋白浓度之后，怎么根据这个浓度上样呢？

3.如何判断bca法测定蛋白质浓度是否符合朗伯比尔定律

4.bca法测蛋白浓度超过量程还准确吗

bca法测定蛋白质的含量实验报告设置5组标准液的目的是什么

       掌握BCA法测定蛋白质浓度的方法。BCA法测定蛋白质的含量实验报告，设置5组标准液的目的，是掌握BCA法测定蛋白质浓度的方法及原理，掌握722型分光光度计移液管的正确使用。蛋白质，由多个氨基酸组成，也是人体的主要组成部分及食物的重要成分之一，体内的肌肉、骨骼和内脏主要是由蛋白质组成的。

BCA法测了蛋白浓度之后，怎么根据这个浓度上样呢？

       BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量的区别：

       1、Bradford法测得的主要是碱性氨基酸和芳香族氨基酸，BCA则没有选择性

       2、BCA法蛋白浓度定量是二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

       Bradford法蛋白定量是染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。蛋白质染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH 4 ) 2 SO 4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。

如何判断bca法测定蛋白质浓度是否符合朗伯比尔定律

       确定一个浓度最低的蛋白样品，以他为参照，计算某一定蛋白质量的各蛋白样品体积，然后就是用裂解液将所有蛋白样品补充到相同体积，那么所有蛋白样品的浓度就相同了（相同体积，相同质量，即浓度相同）

bca法测蛋白浓度超过量程还准确吗

符合。

       BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应,使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。

       原理：蛋白质中含有色氨酸与酪氨酸残基，这两种氨基酸残基具有吸收紫外光的性质，它们的紫外光吸收谱峰值在280nm附近。某些蛋白质含有二硫键，也会在280nm附近吸收紫外光。近紫外吸收法就是根据这个性质，对蛋白质进行定量。因为不同的蛋白质中所含有的色氨酸与酪氨酸的数量存在很大的差异，所以蛋白质在280nm处的吸光度4zso也存在非常大的差异。比如，当蛋白质浓度为1mg/ml时，吸光度4pso可为0-4之间的任何值。但是，大部分的蛋白质的吸光度A2so时0.5-1.5之间的某个值。该方法测定蛋白质的浓度具有明显的优缺点。这种方法操作简单，测定完成后,样品可以被回收，对buffer没有特殊要求，这是该方法的优点。该方法的缺点是:其他的生色基团会影响蛋白质吸收光谱的测定，比如核酸在该波长的紫外吸收能力非常强，少量的核酸就会对蛋白质吸光值的测定造成很大的干扰。同时，不同的蛋白质的消光系数需要在实验前确定。蛋白质浓度的计算:朗伯比尔定律：A(absorbance)=εcl,因此：c(mg/ml)=A/el(cm)。

       bca法测蛋白浓度超过量程肯定不准确的

       超过量程一般就是是超过了标准曲线的最高点，标准曲线是同一蛋白浓度的数值曲线。在一定的浓度范围内，曲线中的点可以连成一条直线，当超出这个范围，因为反应时间或者底物浓度的限制，这些点连成的直线逐渐变成曲线。所以超出标准曲线的点测得的实际值会明显低于其真实值。

       所以bca法测蛋白浓度超过量程肯定不准确的

       今天关于“bac法测蛋白浓度”的讨论就到这里了。希望通过今天的讲解，您能对这个主题有更深入的理解。如果您有任何问题或需要进一步的信息，请随时告诉我。我将竭诚为您服务。